維持培養(yǎng)細胞旺盛生長,有恒定而適宜的溫度。不同種類的細胞對培養(yǎng)溫度要求也不同，例如魚、昆蟲和兩棲類細胞的適宜培養(yǎng)溫度是25-28℃，哺乳動物細胞的適宜培養(yǎng)溫度是35-37℃，發(fā)生轉化的細胞則適合在高于40℃的條件下生長。人體細胞培養(yǎng)的標準溫度為36.5℃±0.5℃,偏離這一溫度范圍,細胞的正常代謝會受到影響,甚至死亡。保持培養(yǎng)箱內(nèi)恒定的溫度是維持細胞健康生長重要因素。CO2培養(yǎng)箱的溫度是通過電熱絲加熱的, 主要有水套式加熱和氣套式加熱兩種加熱系統(tǒng)。
（1）水套式加熱 水套式加熱是通過一個獨立的水套層包圍內(nèi)部的箱體來維持溫度恒定的，其優(yōu)點：水是一種很好的絕熱物質，當遇到斷電的時候，水套式系統(tǒng)就可以比較長時間的保持培養(yǎng)箱內(nèi)的溫度準確性和穩(wěn)定性，有利于實驗環(huán)境不太穩(wěn)定（如有用電限制或經(jīng)常停電）的用戶選用。
（2）氣套式加熱 氣套式加熱是通過遍布箱體氣套層內(nèi)的加熱器直接對內(nèi)箱體進行加熱的，又叫六面直接加熱。氣套式與水套式相比，具有加熱快，溫度的恢復比水套式培養(yǎng)箱迅速的特點，有利于短期培養(yǎng)以及需要箱門頻繁開關取放樣的培養(yǎng)。此外，對于使用者來說氣套式設計比水套式更簡單化（水套式需要對水箱進行加水、清空和清洗，并要經(jīng)常監(jiān)控水箱運作的情況，還有潛在的污染隱患）。
氣套式加熱優(yōu)點總結：
1.重量更輕、運輸或搬運更方便；
2.加熱快，溫度的恢復比水套式培養(yǎng)箱迅速，有利于短期培養(yǎng)以及需要箱門頻繁開關取放樣的培養(yǎng)；
3.不會發(fā)生因為漏水造成樣品污染；
4.可選擇更多滅菌方式（水套利用水作為傳熱介質，高溫加熱滅菌困難）。 為了滿足低溫培養(yǎng)的需求，二氧化碳培養(yǎng)箱廠家勵精圖治開發(fā)出了內(nèi)置制冷系統(tǒng)的產(chǎn)品可供研究者選擇，
5如何滿足細胞培養(yǎng)濕度的要求 水是細胞的重要組成部分，在培養(yǎng)箱中對細胞進行培養(yǎng)過程里，制冷或者制熱直接的影響是細胞的培養(yǎng)基快速蒸發(fā)失水，蒸發(fā)將導致培養(yǎng)基上的滲透作用增強，產(chǎn)生滲透性脫水；培養(yǎng)基中鹽濃度增加，細胞中水分跑出細胞外細胞收縮，新陳代謝變緩，細胞死亡。 培養(yǎng)箱內(nèi)相對濕度的控制室重要的，飽和濕度環(huán)境可以避免培養(yǎng)液中二氧化碳逃逸，保持pH值穩(wěn)定，也能防止由于干燥使培養(yǎng)液中水分蒸發(fā)，滲透壓升高，導致細胞培養(yǎng)失敗。大多數(shù)的二氧化碳培養(yǎng)箱是通過增濕盤的蒸發(fā)作用產(chǎn)生濕氣的，大型的二氧化碳培養(yǎng)箱是用蒸汽發(fā)生器或噴霧器來控制相對濕度水平的。一些培養(yǎng)箱在底部設置濕度蓄水池，這樣可以增強蒸發(fā)作用，但是，這個系統(tǒng)也更復雜，由于復雜結構的增加一些難以預料的問題也會在使用過程中出現(xiàn)。
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